PCR,即聚合酶鏈反應(yīng),是分子生物學(xué)研究和實(shí)驗(yàn)的常規(guī)方法,也是廣泛應(yīng)用于生物學(xué),醫(yī)學(xué)和臨床領(lǐng)域的實(shí)驗(yàn)技術(shù)。它的特點(diǎn)是可以大大增加DNA的痕量。實(shí)驗(yàn)室分為四個(gè)區(qū)域,每個(gè)工作區(qū)域必須嚴(yán)格按一個(gè)方向輸入。不同的工作區(qū)域使用不同的工作服(例如,不同的顏色)。工人離開(kāi)每個(gè)工作區(qū)時(shí)不得帶工作服。四個(gè)領(lǐng)域是:
1.試劑準(zhǔn)備區(qū)
2.樣品處理區(qū)
3.核酸擴(kuò)增區(qū)
4.產(chǎn)品分析區(qū)域
PCR實(shí)驗(yàn)室可以是分散形式或組合形式。為了完成一組PCR實(shí)驗(yàn),通常應(yīng)完成試劑制備,樣品處理,核酸擴(kuò)增和產(chǎn)物分析的四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程。如果實(shí)驗(yàn)技術(shù)要求,則應(yīng)增加樣品破碎過(guò)程。
1.分散PCR實(shí)驗(yàn)室
所謂的分散式PCR實(shí)驗(yàn)室是指完成上述實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室彼此遠(yuǎn)離,并以分散的形式布置。對(duì)于具有這種布置的PCR實(shí)驗(yàn)室,由于每個(gè)實(shí)驗(yàn)都很難相互干擾,因此不需要特殊條件。
2.組合式PCR實(shí)驗(yàn)室
所謂組合PCR實(shí)驗(yàn)室是指將完成PCR的四個(gè)實(shí)驗(yàn)過(guò)程的實(shí)驗(yàn)室彼此相鄰布置以形成獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域的形式。對(duì)于組合PCR實(shí)驗(yàn)室,由于各種實(shí)驗(yàn)的集中安排,很容易引起相互干擾。因此,對(duì)整體布局和屏障系統(tǒng)有一定的要求。每個(gè)房間的入口處都有緩沖室,以減少室內(nèi)和室外空氣的交換。試劑制備室和樣品處理室應(yīng)有輕微的正壓,以防止含有核酸氣溶膠的空氣進(jìn)入并造成污染;核酸擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室應(yīng)具有輕微的負(fù)壓,以防止含氣溶膠的核酸擴(kuò)散到污染試劑和樣品中。
如果使用熒光PCR儀,則可以將擴(kuò)增室和產(chǎn)物分析室合并在一起。
如果房間深度允許,可以在PCR內(nèi)設(shè)置專(zhuān)用走廊。需要指出的是,在減少室內(nèi)和室外空氣的交換中,緩沖室比專(zhuān)用走廊更有意義。
每個(gè)區(qū)域之間應(yīng)存在單向?qū)嶒?yàn)過(guò)程流,物流,人員流和空氣流,以形成單向過(guò)程的保護(hù)性屏障,以避免實(shí)驗(yàn)之間的相互干擾并防止核酸氣溶膠污染實(shí)驗(yàn)過(guò)程和產(chǎn)生錯(cuò)誤的結(jié)果。
PCR實(shí)驗(yàn)室的氣流方向必須嚴(yán)格按照逐漸降低試劑存儲(chǔ)和制備區(qū)域→樣品制備區(qū)域→擴(kuò)增區(qū)域→擴(kuò)增產(chǎn)物分析區(qū)域中的氣壓的方法進(jìn)行,以防止擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)入反應(yīng)室。放大前的區(qū)域以及氣流。需要嚴(yán)格的通風(fēng)設(shè)計(jì)。如果通風(fēng)設(shè)計(jì)不合理,風(fēng)速將會(huì)混亂甚至危害人體健康。
進(jìn)入實(shí)驗(yàn)室區(qū)域的工人應(yīng)遵循以下路徑:
公共清潔區(qū)更衣室(換洗衣服)-緩沖室-實(shí)驗(yàn)區(qū)污染
工作人員離開(kāi)實(shí)驗(yàn)室的途徑是:
污染測(cè)試區(qū)-緩沖間-淋浴房(如果可能的話(huà)可以設(shè)置)-更衣室-公共清潔區(qū)
標(biāo)準(zhǔn)PCR實(shí)驗(yàn)室設(shè)計(jì)規(guī)范
1.主要結(jié)構(gòu)
主體是彩色鋼板和鋁合金型材。房間內(nèi)的所有內(nèi)角和外角均由帶有內(nèi)部圓形鋁的鋁合金50制成,以解決易污染,積塵,難以清潔的問(wèn)題。結(jié)構(gòu)牢固,線條簡(jiǎn)潔,外觀大方,密封性好。
2.標(biāo)準(zhǔn)的三區(qū)分離和氣壓調(diào)節(jié)
PCR過(guò)程分為三個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域:試劑制備,樣品制備和PCR擴(kuò)增檢測(cè)。整個(gè)區(qū)域都有一條整體的緩沖走廊。每個(gè)獨(dú)立的實(shí)驗(yàn)區(qū)域都配備了緩沖區(qū),每個(gè)區(qū)域都通過(guò)氣壓進(jìn)行調(diào)節(jié),以防止試劑和樣本在整個(gè)PCR實(shí)驗(yàn)過(guò)程中受到氣溶膠的污染,并減少擴(kuò)增產(chǎn)物對(duì)人員和環(huán)境的污染。
緩沖液Ⅰ,緩沖液Ⅱ和PCR擴(kuò)增區(qū)的排風(fēng)扇可以打開(kāi)排氣。實(shí)驗(yàn)區(qū)域的外墻和每扇門(mén)都裝有可調(diào)節(jié)風(fēng)量的回風(fēng)孔,空氣通過(guò)回風(fēng)孔排入房間。 。
3.消毒
紫外線燈安裝在三個(gè)實(shí)驗(yàn)區(qū)域和三個(gè)緩沖區(qū)的頂部以及透射窗內(nèi)部,用于消毒。
在試劑制備區(qū)和標(biāo)本制備區(qū),還安裝了移動(dòng)式紫外線燈,以對(duì)實(shí)驗(yàn)臺(tái)進(jìn)行局部消毒。
4.機(jī)械聯(lián)鎖不銹鋼傳送窗
試劑和標(biāo)本通過(guò)機(jī)械互鎖不銹鋼(不建議使用電子互鎖方法)傳輸窗口交付,以確保在傳輸過(guò)程中不污染試劑和標(biāo)本(個(gè)人分流)。
5.地面
建議使用PVC卷曲地板或自流地板作為地面,其完整性要好。易于清潔且耐腐蝕。如果沒(méi)有條件,可以使用水磨石地面,或者大瓷磚的接縫(至少800mm×800mm)應(yīng)小于2mm。
6.照明
該燈應(yīng)為純凈燈,以達(dá)到易于清潔,無(wú)灰塵堆積的特點(diǎn)。
pcr實(shí)驗(yàn)室施工過(guò)程中應(yīng)注意:
●標(biāo)準(zhǔn)的安裝流程和全面的服務(wù)流程。
●嚴(yán)格遵循標(biāo)準(zhǔn)化,科學(xué)設(shè)計(jì)的安裝過(guò)程。
●安裝前,需要確定以下安裝條件:電源電壓,電源入口位置,電話(huà)網(wǎng)線入口位置,進(jìn)水口壓力,最小安裝空間,地面平整度,通風(fēng)口,入口管和落水管位置等。,理想的空間尺寸和通風(fēng)口尺寸。
●實(shí)驗(yàn)室的墻壁,包括天花板,應(yīng)具有牢固的結(jié)構(gòu)和良好的氣密性;所有內(nèi)角應(yīng)采用弧形過(guò)渡;墻壁應(yīng)光滑,不吸水,耐腐蝕,易于清潔和消毒;地板材料應(yīng)符合間隙,無(wú)泄漏,光滑度和耐腐蝕的要求。